В соответствии с приказом № 745 от 19 ноября 2009 года «Об утверждении Правил проведения доклинических (неклинических) исследований биологически активных веществ» доклинические испытания подразделяются на следующие категории:

1. Токсикологические:

• острая токсичность при однократном и повторном введениях;
• токсичность при повторных введениях (подострая, субхроническая, хроническая);
• кумулятивное действие;
• местнораздражающее действие;
• аллергенность;
• иммуннотоксичность;
• тератогенность;
• мутагенность;
• генотоксичность;
• эмбриотоксичность;
• гонадотоксичность;
• канцерогенность;
• пирогенность;

2. Общефармакологические;
3. Специфические фармакологические (указать клинико-фармакологическую группу);
4. Фармакокинетические и токсикокинетические;
5. Химические, физические, биологические, микробиологические и другие научные исследования в процессе доклинических испытаний биологически активных веществ, фармакологических средств, лекарственных средств, изделий медицинского назначения и материалов для их изготовления;

     Доклинические испытания подразделяются на две категории: по GLP и не по GLP. По стандарту GLP проводятся только исследования безопасности (регуляторная токсикология) исследуемого продукта. Это продиктовано тем, что полученные данные по безопасности продукта экстраполируют на организм человека. Рассчитанные дозы препарата на животных переносятся на человека. GLP-исследования занимают более продолжительное время и подвергаются всесторонней проверки и аудиту, до начала, во время проведения и после завершения исследования. Не по GLP проводятся исследования эффективности, и научные исследования.

    Стандарты и приказы не оговаривают сроки выполнения доклинических испытаний любой продукции. Сроки зависят от степени опасности исследуемого вещества, сроков применения в клинической практике (сроки проведения хронической токсичности на 2-х видах животных, не менее чем предполагается для клинических испытаний), наличия подходящей экспериментальной базы (специалистов, методик выполнения, при необходимости получения разрешительных документов для работы с патогенными микроорганизмами или источниками радиоизлучения), объемов финансирования и т.д.

      За период с 2004 по 2008 год были проведены доклинические испытания лекарственного препарата ФС-1 . Доклинические испытания проводились, как в казахстанских научно-исследовательских организациях, так в странах ближнего и дальнего зарубежья.

       Доклинические испытания ФС-1 проводились в соответствии с приказом Министра здравоохранения Республики Казахстан № 51 от 14 февраля
2005 год «Об утверждении Инструкции по проведению доклинических испытаний и (или) исследований биологически активных веществ в Республике Казахстан». Следует отметить, что Национальный стандарт Республики Казахстан СТ РК 1613-2006 «Надлежащая лабораторная практика» был введен в действие, позже 1 января 2008 г.

     Отчеты о доклинических испытаниях ФС-1 были приняты на заседании Фармакологического центра РГП на ПХВ «Национальный центр экспертизы лекарственных средств, изделий медицинского назначения и медицинской техники» Министерства здравоохранения РК 9 октября 2008 года
(вх. № письма 255/01 от 14 октября 2008 года).

        В ходе доклинических испытаний ФС-1 проведены физико-химические, фармацевтические, фармакологические и токсикологические исследования эффективности и безопасности ФС-1.

      Установлены механизмы комплексообразования, структура и физико-химические свойства образующихся соединений, закономерности изменения их биологической активности и токсичности в зависимости от природы и молекулярной массы лигандов.

     Методами квантово-химических расчетов обоснован наиболее вероятный механизм действия отдельных полученных субстанций, который заключается в галогенировании ДНК (РНК) вирусов вне- и внутри зараженной вирусом клетки, который подтвержден в эксперименте с изотопами иода.

      Доклинические исследования препарата показали его низкую цитотоксичность и безопасность с точки зрения генотоксичности. ФС-1 не индуцировал повреждений ДНК лимфоцитов человека и мышей в тесте на ДНК-кометы, а также не индуцировал образование микроядер (индикатор повреждения хромосом) в клетках костного мозга мышей.

       Антивирусная активность препарата ФС-1 изучалась на различных вирусных моделях, различными научными организациями, как отечественными, так и зарубежными. В качестве вирусных моделей использовали:

• Штамм ВИЧ (НІV-1_LAI) исследования проводились в Болгарии. Показано, что препарат ФС-1 имеет четко выраженное вирулицидное действие в концентрации1,5 мг/мл активного вещества.
• Вирус гриппа А (Orthomyxoviridae) штаммы – А/FPV/Rostock/34, А/черноголовый хохотун/Атырау/744/04 (H13N6), вирус гриппа человека — штамм A/Алматы/5/98 – исследования проводились в «Институт микробиологии и вирусологии» РГП «Центр биологических исследований» Министерства образования и науки. В опытах «in vivo» установлено, что предварительное введение цыплятам препарата ФС-1 в концентрации 0,290 мг/кг и 1,458 мг/кг при пероральном приеме препарата в течение 7 дней эффективно предотвращает заражение цыплят вирусом гриппа птиц  A/FPV/Rostock/34 (H7N1) дозе 100 ЭИД₅₀. Все цыплята, получавшие препарат ФС-1 до заражения вирусом A/FPV/Rostock/34 оставались живы при 100 % гибели контрольных птиц. При использовании препарата в концентрации 0,290 мг/кг в течение 7 дней после заражения цыплят вирусом A/FPV/Rostock/34 в дозе 100 ЭИД50 выживаемость цыплят составляла 43 % при 100 % гибели контрольных птиц. Доза препарата ФС-1 — 1,458 мг/кг в опытах по лечению цыплят, зараженных вирусом гриппа A/FPV/Rostock/34 приводила к 100.
• Вирус чумы птиц А/FPV(штамм A/FPV/Waybrige/78/H7N7) — лаборатория патоморфологии Национального научного центра хирургии им. А.Н. Сызганова и Институт общей генетики и цитологии. Показано, что препарат ФС-1 в концентрациях 0,375-0,188 мг/мл активного вещества обладает выраженным вирулицидным действием и минимально активным антивирусным действием при действии на реплицирующийся вирус А/FPV — штамм Waybrige в концентрации 0,188 и 0,094 мг/мл активного вещества.
• Вирус простого герпеса 1-го типа штамм «Victory». Показано, что под действием ФС-1, в концентрации 0,300 мг/мл активного вещества происходит полое ингибирование репродукции вируса простого герпеса 1-го типа.
• Вирус энцефаломиокардита мышей;
• Вирус полиомиелита 1-го типа — Poliovirus-1 (Picornaviridae) штамм Сэбин;
• Цирковирус свиней – Porcine Circovirus (Circoviridae);
• Вирус болезни Ньюкасла (ВБН)- (Paramyxoviridae) – штаммы PMV-1/chicken/LaSota/46, ПМВ-1/курица/Талдыкорган/346/03 — «Институт микробиологии и вирусологии» РГП «Центр биологических исследований» Министерства образования и науки.

Также препарат ФС-1 обладает широкой противомикробной активностью в отношении антибиотикустойчивых и чувствительных грамположительных и грамотрицательных бактерий, микобактерий, грибков и вирусов.

Минимальная ингибирующая концетрация (МИК) варьировала в пределах от 0,02 до 0,3 мг/мл. Причём наибольшую чувствительность проявили клинические изоляты M. tuberculosis SCAID 187.0 (MDR), к изониазиду 562, 892, 535 и 722 и M. bovis 2, 3 и 5.

     ФС-1 вызывает лизис бактериальной клетки, повреждая клеточную мембрану. Изучение мембранолитической активности ФС-1 на M. smegmatis с помощью электронной микроскопии показало, что лизис бактериальной клетки происходит в течение 5 — 30 минут при концентрации ФС-1 от 4 мкг/мл. Кроме того, ФС-1 ингибирует DNA-dependentRNA-polymerase (RNAP) of M. tuberculosis образуя комплекс между бактериальной ДНК и ионом магния RNAP.

     В изучении терапевтической эффективности ФС-1 использовали классическую модель туберкулеза морских свинках, вызванного высоковирулентными клиническими штаммами M. tuberculosis MS-115 и SCAID 187.0, выделенные от больных с MDR-TB.

    Основной особенностью терапевтического действия ФС-1 заключалось в повышении эффективности при комбинации с противотуберкулезными препаратами — изониазидом, рифампицином, пиразинамидом, циклосерином, протионамидом, капреомицином и амикацином. Было замечено, что в процессе лечения туберкулеза морских свинок ФС-1 микобактерии туберкулеза приобретали чувствительность к противотуберкулезным препаратам первого ряда. Повсей видимости это связано с влиянием ФС-1 на геном M. tuberculosis. В исследованиях на других бактериях Streptococcusmutans и S. aureus и S. epidermidis было показано, что комплексы иода влияют на траскрпиционную активность генома микроорганизмов.

   Отмечено также терапевтическое влияние на организм морских свинок. В частности, воздействие ФС-1 препятствует развитию воспаления при туберкулезе, повышает воздушность паренхимы легких и проницаемость капилляров. Это связано со способностью комплексов иода ингибировать продукцию NO и TNF-alpha, а также повышать mucociliary clearance дыхательных путей. Также, комбинированная терапия ФС-1 с противотуберкулезными препаратами снижает частоту нежелательных реакции и токсического воздействия лекарств на организм животных.

   Таким образом, мы с уверенностью можем сообщить, что ФС-1 проявляет эффективность в отношении как ДНК-, так и РНК- содержащих вирусов. Учитывая, что препарат зарегистрирован и доказана его безопасность в клинических испытаниях на людях, у нас есть более чем достаточные основания ожидать, что ФС-1 окажется эффективным в тяжелых случаях коронавирусной инфекции.

   Основанием для этого предложения служат результаты исследований по изучению антивирусной активности препарата ФС-1 в отношении как ДНК содержащих (ВИЧ-1 — семейство Retroviridae, вирус простого герпеса первого типа — семейство Herpesviridae), так и РНК- содержащих вирусов (вирус полиомиелита – семейство Picornaviridae, птичьего и свиного гриппа, гриппа человека – семейство Orthomyxoviridae, вирус болезни Ньюкасла – семейство Paramyxoviridae, и пр.).

     Синергизм действия ФС-1 с противотуберкулезными препаратами первого ряда проявлялся в 2-х кратном снижении сроков излечения и значительном снижении гибели лабораторных животных. Механизм антибактериального эффекта лекарственного средства состоит в специфическом повреждении оболочки клеточной мембраны и блокировании репликации бактериальной ДНК. Наряду с антибактериальным свойством, ФС-1 проявляет и вирулицидную активность in vitro в отношении всех изученных штаммов ДНК- и РНК-содержащих вирусов (ортомиксовирусы, парамиксовирусы, герпесвирусы и ретровирусы).

     Определение антивирусной активности ФС-1 in vivo в отношении ортомиксовирусов и парамиксовирусов показало, что в исследуемых дозах оно приводит к 100 % излечению зараженных животных. В данных экспериментах был доказан  высокое профилактическое действие препарата в отношении ортомиксовирусов и парамиксовирусов. Механизм антивирусного действия лекарственного средства ФС-1 основан на галогенировании вирусной ДНК/РНК и ингибировании ферментов, участвующих в репликации вирусной ДНК/РНК.

     Кроме прямого антимикробного действия доказано наличие выраженного иммуномодулирующего эффекта (иммуномодулятор), проявляющегося в среднем 4-х кратным повышением функциональной активности клеток иммунной системы, причем как неспецифического (моноциты/макрофаги, нейтрофилы) так и специфического иммунитета
(Т-лимфоциты). Происходит усиление продукции цитокинов-активаторов (фактора некроза опухоли-α, интерлейкина-1β, интерлейкина-6, интерлейкина-8, интерферона-α и интерферона-γ), увеличение  эффекторных функций клеток иммунной системы (бактерицидной активности, пролиферации, дифференциации, цитотоксической активности) и повышение устойчивости иммунокомпетентных клеток к апоптозу.

      Свойство индуктора интерферонов является уникальным, по сравнению с другими противоинфекционными средствами, большинство которых, при длительном применении, наоборот, вызывают подавление иммунитета.

    Обращает внимание, что разрабатываемое лекарственное средство вызывает повышение ростовой и клоногенной функций клеток-предшественников костного мозга в культуре, увеличение абсолютного содержания лейкоцитов и клеток-предшественников гранулоцитов в костном мозге животных, а также стимулирует образование клеток-предшественников гранулоцитов в костном мозге животных, что позволяет судить о том, что ФС-1 проявляет свойства гемопоэзмодулирующего фактора.

     В результате проведенных доклинических исследований фармакокинетики лекарственного средства ФС-1 было выявлено, что характер связи между дозой препарата и площадью под фармакокинетической кривой для йодид-иона в крови, а также постоянство инвариантных фармакокинетических параметров указывают на то, что динамика абсорбции, распределения и элиминации лекарственного средства  подчиняется основным принципам линейной фармакокинетики. Он достаточно быстро всасывается из желудочно-кишечного тракта, максимальные значения его концентраций в крови достигаются в течение
1-1,5 часов после его введения. Активное вещество метаболизируется до йодид-ионов, гликопротеидная часть лекарственного средства метаболизируется в печени.

      Полученные данные позволили рекомендовать препарат ФС-1 к испытанию на людях с целью лечения больных туберкулезом.

6 ноября 2008 года (вх. письмо 286/15-08 от 7 ноября 2008 года) лекарственное средство ФС-1 было рекомендовано к проведению клинических испытаний экспертной организацией РГП на ПХВ «Национальный центр экспертизы лекарственных средств, изделий медицинского назначения и медицинской техники» Министерства здравоохранения РК.

Ниже информация о клинических исследованиях

              ⇓ ⇓ ⇓ ⇓ ⇓